ABSTRACT
O objetivo desse trabalho foi avaliar a influência do pré-cultivo de explantes foliares e do meio de cultura na ressuspensão de Agrobacterium tumefaciens para infecção dos explantes. Os meios MS/2 (50% da concentração de sais) e MS N/2 (50% da concentração de NH4NO3 e KNO3) + PGR (1,0µM de TDZ (thidiazuron) + 0,1 µM de ANA (ácido naftalenoacético)) foram testados na ressuspensão da bactéria para infecção dos explantes. O pré-cultivo consistiu da manutenção dos explantes em meio de cultura para formação de calos (MS N/2 + PGR) durante um dia, sendo o tratamento sem pré-cultivo consistituído dos explantes após a excissão dos mesmos. Os explantes foram mantidos no escuro a 25 ± 2ºC mediante a utilização de plástico preto. O delineamento usado foi o inteiramente casualisado com 20 explantes. Os experimentos foram repetidos duas vezes. O meio MS/2 promoveu resultados superiores (22,4%) comparado ao meio MS N/2 + PGR (14,5%) para a percentagem de área com expressão do gene uidA. Aos 7 dias de cultivo em meio seletivo, a percentagem de área expressando o gene uidA foi 1,6 no MS/2 e 0% para o MS N/2 + PGR. O pré-cultivo produziu resultados superiores aos encontrados sem pré-cultivo, atingindo 31,4% de expressão transiente e no tratamento sem pré-cultivo 2,1%. Após 7 dias de cultivo em meio seletivo, a percentagem de área de expressão dos explantes do tratamento com pré-cultivo permaneceu 4,8% e 0% para o tratamento sem pré-cultivo. Os resultados indicam que o précultivo e ressuspensão da bactéria em meio MS/2 aumentaram a eficiência da expressão transiente do gene uidA em explantes foliares de E. saligna.
The aim of this research was to evaluate the effect of the pre-culture of leaf explants and the effect of the culture medium for the Agrobacterium tumefaciens resuspension to the explant infection. The media, MS/2 (half strength) and MS N/2 (10.3 mM NH4NO3 and 9.4 mM KNO3) + PGR (1.0 µM TDZ (thidiazuron) and 0.1 µM NAA (1-Naphthaleneacetic acid)) were tested for the bacteria resuspension. The pre-culture consisted of the maintenance of the explants on culture medium for callus formation (MS N/2+PGR) during one day and the treatment without pre-culture consisted of the use of the explants after the excision of the same ones. At the end of the co-culture, the MS/2 promoted results superiors to the MS N/2+PGR, and the area percentage that presented expression of the gene uidA was of 22.4% compared at 14.5%. To the 7 days of culture on a medium with kanamycin, the area percentage expressing the gene uidA was 1.6 in MS/2 and 0% for the MS N/2+PGR. At the end of the co-culture, the pre-culture produced results superiors to the found in the treatment without pre-culture, reaching 31.4% of expression and in the treatment without pre-culture 2.1%. After 7 days of culture on a medium with kanamycin, the area percentage of explant expression of the treatment with pre-culture stayed 4.8% and 0% for the treatment without pre-culture. The results indicate that the pre-culture and the bacteria resuspension in MS/2 increase the efficiency of the transient expression of the gene uidA in leaf explants of E. saligna.
Subject(s)
Transformation, Genetic , Agrobacterium tumefaciens , Eucalyptus , Genes , GlucuronidaseABSTRACT
O abacaxi ornamental (Ananas bracteatus Schult. f.) é bastante utilizado em composições paisagísticas para delimitar áreas ou canteiros. A micropropagação permite obter altas taxas de multiplicação, podendo ser uma alternativa viável e vantajosa de propagação vegetativa, visto que a demanda por esta espécie vem aumentando, tanto no mercado nacional quanto no internacional. Neste trabalho objetivou-se avaliar a influência de diferentes irradiâncias e concentrações de sacarose durante o enraizamento in vitro, sobre a sobrevivência das mudas na fase de aclimatização. Para tanto, foram testadas diferentes concentrações de sacarose (0, 10, 20 e 30 g L-1) no meio de enraizamento, bem como duas irradiâncias (22,9 e 66,9 mmol m-2 s-1) em sala de crescimento. O melhor resultado em termos de enraizamento foi obtido no meio de cultura contendo 30 g L-1 de sacarose sob irradiância de 66,9 mmol m-2 s-1. Após a fase de enraizamento in vitro, as plantas foram transferidas para casa de vegetação e mantidas sob nebulização intermitente por 60 dias. Os resultados de sobrevivência aos 30 e 60 dias não diferiram estatisticamente para os dois níveis de irradiância testados. Entretanto, para concentrações de sacarose, a testemunha apresentou sobrevivência inferior (50 por cento) diferindo estatisticamente dos demais tratamentos que foram semelhantes entre si (95 a 100 por cento).
Ornamental pineapple (Ananas bracteatus Schult. f.) is often used in landscape compositions in order to limit areas or borders. Micropropagation allows high multiplication rates and may be an interesting technique of vegetative propagation in order to meet the need of plants of this species that is rising on national and international markets. The objective of this study was to determine the effect of several light irradiances and sucrose concentrations during in vitro rooting on survival during the acclimatization stage. Several concentrations of sucrose (0, 10, 20 or 30 g L-1) in the rooting medium and two light irradiances (22.9 and 66.9 mmol m-2 s-1) in the culture room were tested. The best results of rooting were obtained on culture medium containing 30 g L-1 sucrose under an irradiance of 66.9 mmol m-2 s-1 . The plants were then transferred to the greenhouse and cultured under intermittent mist for 60 days. There was no significant difference among the results of survival under the two irradiances tested. However, for sucrose concentrations, the survival rate of the control (50 percent) was statistically inferior to that of the other treatments that were similar among them (95 and 100 percent).
ABSTRACT
The objectives of the present work were to establish the minimal lethal dose of the selective agent to determine the type and concentration of appropriate antibiotics for the elimination of Agrobacterium tumefaciens inoculated explants, without interfering with the regenerative potential of the E. camaldulensis cotyledonary explants. Non-transformed explants were cultivated in medium supplemented with kanamycin. The results showed that the antibiotic was suitable for the selection of transformed cells in the concentration of 9 mg L-1 as it inhibited the growth of non-transformed cells. Cotyledons infected with A. tumefaciens were cultivated in MS N/2 medium supplemented with BAP, ANA, Km and cefotaxime or AugmentinÒ . The highest average of regenerated shoots by explant (5,4) was observed in the presence of 300 mg L-1 of AugmentinÒ /15 days, followed by 150 mg L-1/15 days and 100 mg L-1/30 days.
O presente trabalho teve como objetivos determinar o tipo e a concentração de antibióticos adequados para a eliminação de Agrobacterium tumefaciens de explantes inoculados e estabelecer a dose letal mínima do agente seletivo canamicina (Km), sem interferir com o potencial regenerativo do explante cotiledonar de E. camaldulensis. Para a avaliação da eficiência dos antibióticos, cotilédones infectados com A. tumefaciens foram cultivados em meio MS N/2 com BAP, ANA, canamicina e cefotaxima ou AugmentinaÒ . Foi observada a maior média de brotos regenerados por explante (5,4) na presença de 300 mg.L-1 de AugmentinaÒ /15 dias, seguido por 150 mg.L-1/30 dias, e 100 mg.L-1/30 dias. Explantes cotiledonares não transformados foram cultivados em meio de cultura suplementado com antibiótico canamicina onde a concentração adequada para a seleção de células transformadas foi de 9 mg.L-1.